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本试剂盒主要用于植物组织中叶绿素的提取以及定量检测叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。

叶绿素不溶解于水，而溶于有机溶剂，以有机溶剂提取叶绿素，根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比，即A=αCL，其中α为比例常数，当溶液浓度以百分比浓度为单位，层液厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数，在该试剂盒情况下叶绿素a和叶绿素b在665nm、649nm处有最大吸收波，根据经验公式可计算出叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。

组分	50T	100T
Chlorophyll Assay Buffer	530mL	2×530mL
提取粉剂	3g	6g

保存：室温，有效期1年。


研钵或匀浆器、离心管、滤纸或纱布、离心机、96孔板、酶标仪

• 为了避免叶绿素见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
  
• 当样品吸光值大于1时，可适当稀释后再进行测定，计算时乘以稀释倍数。
  
• Chlorophyll Assay Buffer易挥发，不用时需拧紧瓶盖。
  
• 叶绿素提取液不能出现浑浊现象，否则应重新过滤。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 叶绿素提取：
  
  • 取菠菜或其他植物新鲜叶片，洗净，擦干，去中脉，称取剪碎的新鲜样品0.1g，置于研钵或匀浆器，加入少量提取粉剂(约50mg)和1mL Chlorophyll Assay Buffer，研磨或匀浆成液态。
    
  • 将研磨液或匀浆液转移至10mL离心管，用少量Chlorophyll Assay Buffer冲洗研钵或匀浆器数次，最后连残渣一同倒入10mL离心管，补加Chlorophyll Assay Buffer至10mL，混匀，避光放置。
• 滤纸或三层纱布过滤，留取滤液，也可采用离心，取上清液待测。
  
• 测定：酶标仪开机预热30min以上，调节多波长至665nm和649nm；取叶绿素提取液200μL加入96孔板中，以Chlorophyll Assay Buffer调零，分别用酶标仪测定提取液在665nm、649nm处吸光度(A₆₆₅、A₆₄₉)。

叶绿素a含量(mg/g)＝C_a×V×N/(W×1000)
叶绿素b含量(mg/g)＝C_b×V×N/(W×1000)
总叶绿素含量(mg/g)＝C_T×V×N/(W×1000)
C_a＝(13.95×A₆₆₅－6.88×A₆₄₉)/0.6＝23.25×A₆₆₅－11.467×A₆₄₉ (mg/L)
C_b＝(24.96×A₆₄₉－7.32×A₆₆₅)/0.6＝41.6×A₆₄₉－12.2×A₆₆₅ (mg/L)
C_T＝(6.63×A₆₆₅＋18.08×A₆₄₉)/0.6＝11.05×A₆₆₅＋30.133×A₆₄₉ (mg/L)
V＝叶绿素提取液体积(ml)＝10(ml)
N＝稀释倍数
W＝样品鲜重或干重(g)
1000＝ml与L的单位换算
0.6＝200μL提取液在酶标板中的光径(cm)
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